CY5-Protein A Cyanine5-Protein A 花菁染料CY5标记蛋白A

产品名称：CY5-Protein A Cyanine5-Protein A 花菁染料CY5标记蛋白A

产品描述：

CY5-Protein A Cyanine5-Protein A 花菁染料CY5标记蛋白A

一、产品概述

CY5-Protein A 是将 近红外荧光染料 Cyanine5（CY5） 与 蛋白A（Protein A） 共价偶联而形成的荧光标记蛋白。Protein A 是一种来源于 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） 的细胞壁蛋白，具有高亲和力结合 免疫球蛋白 Fc 区域 的能力，常用于 *体纯化、免疫检测及*体示踪。

通过 CY5 标记，Protein A 获得 红色近红外荧光信号（激发波长约 650 nm，发射波长约 670 nm），可用于 荧光免疫检测、流式细胞术、共聚焦显微镜及蛋白示踪研究。CY5-Protein A 将 Protein A 的天然*体结合功能与 CY5 的高亮度荧光特性 相结合，为科研实验提供高灵敏度的可视化工具。

二、分子结构与标记原理

CY5-Protein A 分子结构主要由三个组成部分构成：

荧光模块（Cyanine5, CY5）

CY5 是一种红色至近红外荧光染料，激发波长约 650 nm，发射波长约 670 nm。

光稳定性好、量子产率高，可用于长时间成像和定量分析。

蛋白模块（Protein A）

Protein A 能高效结合 IgG Fc 区域，常用于*体纯化及免疫检测。

保持天然三维结构，确保*体结合功能完整。

化学连接模块

CY5 通常通过 NHS ester 或 Sulfo-NHS ester 与 Protein A 的赖氨酸氨基共价结合，形成稳定的酰胺键。

偶联过程中可调节染料与蛋白摩尔比，以平衡荧光强度和蛋白活性，保证 Fc 区域结合能力不受影响。

这种设计确保 CY5-Protein A 荧光强、*体结合功能保留、结构稳定，适用于多种体外与体内实验体系。

三、制备方法

CY5-Protein A 的制备一般包括以下步骤：

1. 荧光染料活化

选用 CY5 的 NHS ester 或 Sulfo-NHS ester 形式，使其能够与蛋白赖氨酸氨基共价结合。

2. 偶联反应

在 PBS 或碳酸盐缓冲液（pH 7.4–8.5）中，将活化的 CY5 与 Protein A 混合。

NHS 酯与 Protein A 氨基形成稳定酰胺键。

反应在低温（4℃）和避光条件下进行，以保持蛋白结构和荧光性能。

3. 纯化

采用透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的 CY5。

得到高纯度 CY5-Protein A，保持蛋白完整性及荧光特性。

4. 表征

紫外-可见光谱：CY5 特征吸收峰约 650 nm

荧光光谱：发射峰约 670 nm

SDS-PAGE：检测蛋白完整性

标记度测定（DOL）：确定平均每个 Protein A 分子偶联的 CY5 数量

通过表征方法，可确保 CY5-Protein A 的荧光性能、蛋白活性及纯度满足实验标准。

四、理化性质

激发波长（Ex）：约 650 nm

发射波长（Em）：约 670 nm

外观：红色至深红色冻干粉末或溶液

溶解性：可溶于 PBS、Tris 缓冲液及水性溶液

储存条件：−20℃ 避光保存

稳定性：低温避光条件下荧光和蛋白活性稳定

CY5-Protein A 在水溶液和生物体系中均表现出优良的稳定性，适用于多种实验条件。

五、产品特点

红色近红外荧光：适合多通道共聚焦显微镜和流式细胞术，便于与绿色荧光染料组合。

保留*体结合功能：Protein A 能高效结合 IgG Fc 区域，适用于免疫检测和*体示踪。

多用途应用：适用于*体纯化、免疫成像、蛋白示踪及流式细胞术。

光稳定性好：*光漂白，可进行长时间成像实验。

高纯度低非特异性吸附：实验信号可靠、特异性高。

六、主要应用领域

1. *体纯化与免疫检测

CY5-Protein A 可结合 Fc 区域，用于荧光免疫检测及*体示踪。

可在流式细胞术或共聚焦显微镜中直接观察*体结合情况。

2. 细胞成像与共聚焦显微镜

可用于观察*体-Protein A 复合物在细胞或组织中的分布。

红色荧光可与其他染料组合实现多通道成像。

3. 流式细胞术

可用于定量分析*体结合情况及细胞表面*原分布。

4. 蛋白示踪与动力学研究

可用于 Protein A 在体外或体内体系中的运输、摄取及代谢过程研究。

5. 纳米医学及生物材料研究

可用于评估蛋白与纳米载体或生物材料的结合及靶向能力。

七、实验使用建议

避光操作：CY5 对光敏感，操作和储存需避光。

缓冲液选择：推荐 PBS 或 Tris，避免强还原剂或高浓度游离氨基。

温度控制：低温（4℃）操作可保持蛋白结构及荧光性能。

浓度优化：根据实验需求调整工作浓度，保证信号清晰且蛋白结合功能完整。

分装储存：冻干分装可延长使用寿命，避免反复冻融。

八、总结

CY5-Protein A（花菁染料 CY5 标记蛋白A） 是结合 Protein A 天然*体结合功能与 CY5 红色荧光特性 的高性能标记蛋白。通过红色荧光信号，可在体外研究*体-Protein A 相互作用、免疫复合物分布及蛋白示踪，同时保留蛋白天然功能。

凭借 明亮红色荧光、*体结合功能完整、光稳定性好及多用途应用，CY5-Protein A 广泛应用于 *体纯化、免疫检测、流式细胞术、共聚焦显微镜及蛋白示踪研究，为生命科学和生物医学实验提供可靠、可视化的实验工具。

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