罗丹明B-乳铁蛋白 RB-Lactoferrin 罗丹明 B 标记乳铁蛋白

产品名称：罗丹明B-乳铁蛋白 RB-Lactoferrin 罗丹明 B 标记乳铁蛋白

产品描述：

罗丹明B-乳铁蛋白 RB-Lactoferrin 罗丹明 B 标记乳铁蛋白

一、产品概述

RB-Lactoferrin（Rhodamine B-Lactoferrin） 是一种将 罗丹明B（Rhodamine B，RB）荧光染料 与天然铁结合蛋白 乳铁蛋白（Lactoferrin, LF） 进行共价偶联的荧光标记蛋白。乳铁蛋白是一种广泛存在于乳汁及体液中的多功能糖蛋白，具有 铁离子结合、*菌、免疫调节及*炎 等生物活性。通过将 RB 与乳铁蛋白连接，RB-Lactoferrin 不仅保留乳铁蛋白的天然生物功能，还具备 明亮橙红色荧光信号，广泛应用于 细胞成像、受体介导内吞研究、蛋白动力学及生物材料研究 等领域。

罗丹明B 是一种光稳定性强、荧光量子产率高的染料，激发波长约为 540–560 nm，发射波长约为 570–590 nm，能够在复杂生物体系中提供清晰、稳定的荧光信号。通过化学偶联，RB-Lactoferrin 能够在保持乳铁蛋白结构与功能活性的同时，实现可视化示踪，为乳铁蛋白的研究提供高效工具。

二、分子结构与标记原理

RB-Lactoferrin 的分子设计主要包括三个功能模块：

罗丹明B荧光模块

提供明亮稳定的橙红色荧光信号，用于荧光检测和成像。

光稳定性好，适用于长期实验观察。

乳铁蛋白功能模块

乳铁蛋白作为天然铁结合糖蛋白，具有高亲和力的铁离子结合位点。

可与乳铁蛋白受体（LfR）结合，被多种细胞摄取，实现受体介导的内吞。

连接模块（化学偶联）

罗丹明B通过 NHS ester 或异硫氰酸酯形式与乳铁蛋白的赖氨酸氨基共价结合，形成稳定的酰胺键。

偶联过程中通常控制染料与蛋白摩尔比，以保证荧光信号与蛋白功能的佳平衡。

这种设计确保了 RB-Lactoferrin 荧光强度高、蛋白功能保持完整，同时在细胞和体外实验中具有可靠的追踪性能。

三、制备方法

RB-Lactoferrin 的制备通常包含以下步骤：

1. 荧光染料活化

将罗丹明B转化为 Rhodamine B-NHS ester 或 Rhodamine B-ITC（异硫氰酸酯）。

活化后的染料可与蛋白分子中的氨基或巯基反应形成共价键。

2. 偶联反应

在 PBS 或碳酸盐缓冲液（pH 7.4–8.5）中，将 RB 活化物与乳铁蛋白混合。

罗丹明B通过 NHS ester 或 ITC 基团与乳铁蛋白的赖氨酸氨基形成稳定的酰胺键，生成 RB-Lactoferrin。

反应一般在低温（4°C）和避光条件下进行，以保证蛋白稳定性和荧光强度。

3. 纯化

采用 透析、凝胶过滤层析或超滤离心 去除未反应染料和小分子杂质。

得到高纯度的 RB-Lactoferrin，保留蛋白结构完整。

4. 表征

紫外-可见光谱：确认罗丹明B吸收峰（约550 nm）

荧光光谱：发射峰约在 580–590 nm

SDS-PAGE：检测蛋白完整性

标记度（DOL）：测定平均每个乳铁蛋白分子上标记的罗丹明B数量

通过这些分析，可确保 RB-Lactoferrin 的高质量与可靠性能。

四、理化性质

激发波长（Ex）：540–560 nm

发射波长（Em）：570–590 nm

外观：橙红色冻干粉末

溶解性：易溶于 PBS、Tris缓冲液及水溶液

储存条件：−20℃ 避光

稳定性：低温避光条件下稳定，荧光信号可持续长期使用

RB-Lactoferrin 在水溶液中稳定，能够维持高荧光强度和蛋白功能，适用于各种实验条件。

五、产品特点

强荧光信号：罗丹明B提供明亮橙红色荧光，适合高灵敏度检测。

保留乳铁蛋白活性：蛋白受体结合能力及铁结合功能保持完整。

适用于多种实验平台：流式细胞仪、共聚焦显微镜、荧光显微镜均可检测。

高光稳定性：*光漂白，适合长时间成像实验。

高纯度与低非特异性吸附：纯化后适合体外及体内实验使用。

六、主要应用领域

1. 细胞内乳铁蛋白摄取研究

通过乳铁蛋白受体（LfR）介导的内吞，RB-Lactoferrin 可用于研究 细胞摄取动力学。

在肿瘤细胞、脑内皮细胞及免疫细胞等多种细胞类型中均可使用。

2. 药物递送与纳米载体研究

RB-Lactoferrin 可作为 靶向蛋白模型，评估乳铁蛋白修饰的纳米载体或药物在体内的分布。

可用于脑靶向递送研究，因为乳铁蛋白可跨越血脑屏障。

3. 细胞成像与共聚焦显微镜

橙红色荧光信号可直观观察乳铁蛋白在细胞内的分布及转运过程。

4. 生物材料研究

可用于检测材料表面对乳铁蛋白吸附行为，以及蛋白-材料相互作用研究。

5. 荧光定量与示踪

用于乳铁蛋白动力学分析、受体结合实验和蛋白示踪实验，提供定量信息。

七、实验使用建议

避光操作：操作和储存需避光，以防荧光衰减。

缓冲液选择：PBS 或 Tris 缓冲液为佳选择，避免强还原剂或游离氨基干扰标记。

温度控制：推荐低温（4℃）操作，避免蛋白变性。

浓度优化：根据实验类型调整工作浓度，确保荧光信号可检测且蛋白活性不受影响。

分装储存：冻干分装可延长产品寿命，避免反复冻融。

八、总结

RB-Lactoferrin（Rhodamine B-乳铁蛋白） 是一种结合 天然乳铁蛋白与罗丹明B荧光染料 的高性能标记蛋白。通过荧光示踪，研究人员可在细胞及生物体系中观察乳铁蛋白的摄取、分布和转运，同时保持蛋白本身的生物活性。

凭借高亮度、光稳定性强、蛋白活性保持良好等优点，RB-Lactoferrin 广泛应用于 细胞成像、受体介导内吞研究、纳米药物递送、蛋白动力学及生物材料研究。其在生命科学研究和纳米医学开发中，是观察和分析乳铁蛋白行为的重要工具，为科学实验提供了可靠、可视化的解决方案。

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