Cy5-PE Cyanine5-Phycoerythrin Cy5标记藻红蛋白

产品名称：Cy5-PE Cyanine5-Phycoerythrin Cy5标记藻红蛋白

产品描述：

Cy5-PE Cyanine5-Phycoerythrin Cy5标记藻红蛋白

一、产品概述

Cy5-PE（Cyanine5-Phycoerythrin） 是一种将 Cyanine5（Cy5）荧光染料 共价偶联到 藻红蛋白（Phycoerythrin, PE） 分子上的荧光标记蛋白。藻红蛋白是一种来源于红藻和蓝藻的天然荧光蛋白，具有天然明亮的橙红色荧光信号，其光学性质稳定且量子产率高。

通过 Cy5 的标记，PE 的发射光谱被延伸到 远红光区（650–670 nm），实现与常规荧光通道（FITC、PE、PerCP等）的多色联合检测而无显著光谱重叠，从而大幅提升荧光实验的通道灵活性。Cy5-PE 常被用于 流式细胞术、多色免疫荧光分析、共聚焦显微镜成像以及免疫检测实验。

Cyanine5 是一种具有良好光稳定性和量子产率的荧光染料，在 约650 nm激发、670 nm发射 的条件下可提供稳定且明亮的红色荧光。Cy5-PE 的构建既保留了 PE 的高分子荧光能力，也赋予了远红色荧光特性，使其成为多色荧光分析中理想的荧光标记物。

二、分子结构与标记原理

Cy5-PE 的制备基于 Cyanine5 活性酯（NHS ester 或 Maleimide衍生物） 与 PE 蛋白分子上的 赖氨酸氨基 或 巯基残基 进行共价偶联的原理。

藻红蛋白（PE） 是一种高分子量球状蛋白复合物，具有多个天然色素结合位点，天然荧光强度高。

Cy5 通过与 PE 的可反应残基形成共价键（如胺基–NHS反应生成稳定的酰胺键），使染料固定在蛋白分子上。

标记后，Cy5-PE 保留 PE 的天然荧光特性，同时提供远红色荧光，可用于多通道联合检测。

标记过程中通常需要控制 Cy5 与 PE 的摩尔比，以保证 荧光信号强度和蛋白活性之间的平衡。过量染料可能导致蛋白聚集或荧光猝灭，而适度标记则可维持高灵敏度检测。

三、制备方法

Cy5-PE 的制备主要包括以下步骤：

1. Cy5活化

通过将 Cy5 转化为 NHS ester 或 maleimide 衍生物，使其具有可与蛋白反应的活性基团。

2. 偶联反应

将活化 Cy5 与 PE 蛋白在弱碱性缓冲液（如 PBS, pH 7.4–8.0）中混合。

Cy5-NHS 通过与 PE 的赖氨酸氨基形成稳定的酰胺键，从而将荧光染料固定在蛋白分子上。

反应一般在低温条件下进行，避免光照，确保荧光稳定性。

3. 纯化

通过透析、凝胶过滤或超滤去除未反应的 Cy5 分子。

得到纯化后的 Cy5-PE，其荧光性能稳定，适用于下游实验。

4. 表征

紫外-可见光谱：确认 Cy5 荧光吸收峰

荧光光谱：测定荧光发射峰及强度

SDS-PAGE / 免疫电泳：检测蛋白分子完整性

标记度测定（DOL）：确定每个 PE 分子上的 Cy5 平均标记数量

四、理化性质

激发波长（Ex）：约 650 nm

发射波长（Em）：约 670 nm

外观：深红色至紫红色冻干粉末

溶解性：可溶于 PBS、Tris缓冲液及水性溶液

储存条件：−20℃，避光保存

稳定性：在低温和避光条件下稳定，荧光信号持续性良好

Cy5-PE 在水溶液中保持高荧光强度，适合长时间储存和重复实验使用。

五、产品特点

明亮的远红色荧光：避免与 FITC、PE 等常规染料的光谱重叠，适合多色联合检测。

高灵敏度：Cy5-PE 的高荧光量子产率提供可靠信号，可用于低丰度标记分析。

保留天然蛋白功能：PE 的蛋白结构保持完整，可在免疫检测或受体结合实验中使用。

多用途：适用于流式细胞术、免疫荧光、共聚焦成像等多种荧光实验。

光稳定性强：Cy5 荧光耐光照、信号衰减慢，实验可靠性高。

六、主要应用领域

1. 流式细胞术（FACS）

Cy5-PE 可作为 免疫标记*体的荧光二级探针，实现多色分析。

适用于细胞表面*原定量分析、淋巴细胞分型和免疫监测。

2. 共聚焦显微镜与荧光成像

可用于观察 PE 蛋白在细胞或组织中的分布。

远红色信号可与 FITC、Cy3 等通道联合成像，实现多色荧光分析。

3. 多色免疫分析

在多重免疫荧光实验中，Cy5-PE 能与其他荧光标记物组合，提高检测灵活性。

4. 荧光定量与示踪

适用于蛋白动力学、受体介导内吞、细胞摄取研究。

可用于追踪生物体系中的蛋白分布和降解过程。

5. 生物医学研究与药物开发

用于纳米递送系统、免疫诊断试剂及蛋白药物示踪研究。

七、实验使用建议

避光操作：Cy5-PE 对光敏感，操作及储存应避光。

缓冲液选择：建议使用 PBS 或 Tris，避免含游离氨基的缓冲液。

温度控制：实验中保持 4℃ 或室温，避免蛋白变性。

浓度优化：根据实验需求调整荧光探针浓度，确保信号清晰且蛋白功能不受影响。

分装储存：冻干分装可延长使用寿命，避免反复冻融。

八、总结

Cy5-PE（Cyanine5-藻红蛋白） 是一种结合 天然藻红蛋白与远红荧光染料 Cy5 的高性能荧光标记蛋白。通过 Cy5 的标记，PE 的天然荧光特性被扩展到远红区，实现多通道联合检测，信号明亮且稳定。

其广泛应用于 流式细胞术、多色免疫荧光、共聚焦成像、蛋白追踪以及纳米载体研究 等领域，为生命科学研究提供了可靠且灵活的荧光工具。凭借高光稳定性、高量子产率和多色兼容性，Cy5-PE 成为多色荧光实验和生物医学研究中不可或缺的标记蛋白之一。

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