标记蛋白抗体/葡聚糖制备方法及操作步骤

产品名称：标记蛋白抗体/葡聚糖制备方法及操作步骤

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标记蛋白抗体/葡聚糖制备方法及操作步骤 一般每个抗体可以标记3-5个，标记时，与抗体的比率受抗体浓度影响，对于10 mg/ml 的抗体溶液来说，应过蛋白12倍（摩尔数），对于2 mg/ml 的抗体溶液应过20倍，也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中。 蛋白样品不得含有叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他有自由氨基的添加物。 一、试剂和器材： 1、 标记反应溶液：0.1MpH 7.2?PBS（0.15M sodium chloride） NaCl 8.77 g?；Na2HPO4·12H2O 32.3g?；NaH2PO4·2H2O 4.5g；加双蒸水 900mL 左右，用HCl/NaOH 调pH 7.2，后定容为 1000mL 2、 10mM NHS-dPEG4-Biotin配方：称取0.56mg NHS-dPEG4-Biotin（分子量为587）?，溶解于95 μl 纯水中，临用前配置，不可储存，立刻使用。NHS-PEG4-Biotin容易潮解，开瓶前平衡室温。也可以配置200 nmol/L 储备液：20mg NHS-dPEG4-Biotin?溶解于170μl DMSO中，-20℃稳定几个月。 由于NHS-PEG4-Biotin昂贵，而且使用量少，不能保存，配制时，直接将NHS-PEG4-Biotin放入1.5ml EP管中，以实际称量的NHS-PEG4-Biotin按比率加入纯水。 3、滤管 ⑴、Millipore滤管[0.5ml 10KD]:截留分子量10KD，残留体积200μl，蛋白回收率95%，7500×g（允许的大离心力14000×g）离心10min。 ⑵、Millipore滤管[0.5ml 50KD]:截留分子量50KD，残留体积80μl，蛋白回收率94%，7500×g（允许的大离心力14000×g）离心5 min。 ⑶、Amicon Ultra -0.5ml离心滤管（Millipore），，的终浓缩物体积：5-15ul。 二、抗体滤处理 标记前需要应用截留分子量为50kDa 的滤柱对抗体进行标记前纯化处理(如果不是抗体，要按蛋白分子量来确定滤柱截留分子量)，以除去蛋白样品中可能含有的叠氮钠、BSA、甘氨酸、Tris或其他有自由氨基的添加物，干扰标记反应。 具体操作步骤： 1、 于滤柱中加入200μl 标记反应溶液，加入500ug 单克隆抗体，混匀。 2、 4℃，6000rpm，离心2min。弃滤液。 3、于滤柱中加入100μl 标记反应溶液，混匀。4℃，Max 14000×g，2min。 4、 重复步骤2 6到7次。 5、 混匀滤柱中的残留的液体，室温静置1min。 6、 将滤柱反转倒置于一新的滤管中，4℃，1000×g，2min，收集滤液。 7、 取50μl PBS于滤柱中混匀，静置1min。 8、 倒置滤柱，4℃，6000rpm，2min。收集滤液，与步骤6的滤液合并，4℃放置备用。用标记反应溶液调节抗体浓度到2mg/ml （0.25ml）。 三、标记抗体 1、 计算抗体标记需要用量。? 抗体浓度?2?mg/ml时的简要计算： 1mL of 2?mg/mL?IgG (150,000 MW)需要26?μL of ?10mM ?NHS-PEG4-Biotin 具体计算方式见附录一（标记计算） 2、 滤后的滤液加入NHS-PEG4-Biotin溶液，室温反应1h。 3、?葡聚糖凝胶分离纯化(游离)： 四、葡聚糖凝胶分离纯化标记抗体操作步骤： ?（一）、试剂： ?1、纯化柱处理液 :100?mmol/L?Na0H; ?2、纯化柱平衡液:?50mmol/L?Tris-HCl缓冲液(pH7.4)，每升含0.5g NaN3?，8g NaCl; 3、样品洗脱液:同纯化柱平衡液; 4、标记抗体保护液（50×）:?10ml0.01M pH7.2 PBS 中加入0.5g BSA，0.2g NaN3。 ? （二）、凝胶过滤： 方法见“凝胶过滤法纯化微量标记蛋白” 五、标记抗体的保存方法 将“标记抗体保护液（50×）”加入到标记抗体溶液中，使BSA终浓度为0.1%，4 ℃?或-20 ℃?保存。 ? 六、数据记录： 抗体浓度： ?mg/ml ?加入抗体体积： ?μl 标记前抗体体积： μl ?加入NHS-PEG4-Biotin体积： ?μl 纯化柱规格： ?cm ×?cm?凝胶体积： ml 加入标记抗体体积：?μl ? 洗脱溶液 1ml/管收集，到核酸蛋白检测仪显示出峰后，改为0.5ml/管收集，并记录数据： 管号 1 2 3 4 洗脱液体积 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? 管号 5 6 7 8 洗脱液体积 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? 管号 9 10 11 12 洗脱液体积 ? ? ? ? A280 ? ? ? ? 附录： 一、标记计算： ?1、不同抗体浓度时，抗体与Sulfo-NHS-Biotin的比率： ?Sulfo-NHS-Biotin?MW：589 ? Sulfo-NHS-Biotin：抗体 抗体浓度10-12mg/ml时 12 抗体浓度4-7mg/ml时 16 抗体浓度1-3 mg/ml时 20 抗体浓度0.5mg/ml时 50 2、10mmol/L Sulfo-NHS-Biotin?配方： Sulfo-NHS-Biotin （mg) PBS（μl) Sulfo-NHS-Biotin （mg/μl) 0.56 95.1 0.00589 ? ?3、标记计算加入体积计算： ? 计算公式 抗体浓度 2?mg/ml时* 抗体浓度（ mg/ml） ? 4.5 抗体加入量（ml) ? 0.11 抗体加入量（mg) ?抗体浓度×抗体加入量 0.495 抗体的毫摩尔数（其他蛋白注意分子量） 抗体加入量/1500000 0.0000033 需要的活化Biotin量（mmol） 抗体的毫摩尔数×20 0.000066 活化Biotin量（mg） Sulfo-NHS-Biotin量 （毫摩尔）×589 0.038874 需要10mmol/L 活化Biotin体积（μl） 活化Biotin量（mg） /活化Biotin浓度（mg/μl) 6.6 西安齐岳生物可以提供的定制材料包括有： dUTP-biotin Biotin-Ubiquitin 修饰的纳米银探针 化的壳聚糖Bio-CS 星形七臂官能化聚己内酯(CDSPCABCL) 修饰的Pluronic普朗尼克 修饰二茂铁Biotin-Fc AP-tag标签的FOXM1真核表达载体 Biotin-PEG-PLLA-PLL 聚乙二醇-聚乳酸-二丙烯酸酯(PPA)共聚物 Mpeg-b-PCL-b-PPEEA聚乙二醇-聚已内酯-聚（氨乙基乙撑磷酸酯） PLGA-PPEEA 聚（氨乙基乙撑磷酸酯）-聚乳酸-羟基乙酸共聚物 PTMC-PEG-PTMC 修饰的冬凌草甲素脂质体 /双配体修饰的壳聚糖材料 FA-CS-g-PSBMA?-壳聚糖-磺酸甜菜碱 乳糖修饰壳聚糖 乳糖修饰去甲素(Lac-NCTD) 去甲素壳聚糖纳米粒(NCTD-CS-NPs) Biotin偶联乳糖 半乳糖化壳聚糖接枝聚乙烯亚胺galactosylated chitosan-g-PEI RGD多肽偶联壳聚糖chitosan 半乳糖修饰的巯基化壳聚糖 甘草酸表面修饰壳聚糖GA-chitosan 甲氨喋呤-乳糖酰基壳聚糖MTX-壳聚糖 甲氨蝶呤化壳聚糖纳米粒MTX-Biotin-CS 修饰β2微球蛋白 修饰稀土掺杂无机荧光纳米颗粒 修饰萤火虫荧光素酶 化微细纤维肽修饰IGF-1 修饰水溶性共轭聚合物(PFPNBr-biotin) BDNF-PEG-biotin 化乙酰普鲁兰多糖 FAM-Biotin,FITC-Biotin绿色荧光标记 Biotin-NHS活化脂修饰 PHEMA-biotin 修饰聚(甲基丙烯酸-2-羟乙酯) PLGA-Biotin?修饰PLGA Biotin修饰红细胞膜 poly(NIPAAm-co-Ada) 修饰的多肽RGD Biotin修饰CdTe量子点 化修饰的聚己内酯(PCL/Biotin) Biotin-PEG-b-Leu 链霉亲和素化的量子点(streptavidin-QDs) Prazosin-PEG2000-biotin (Biotin)表面功能化修饰多壁碳纳米管 Biotin-PEG-PLL-peptide-DOX PLL-PEG-Biotin Biotin-PEG-c(RGDyK) biotin-HWTX-Ⅰ标记蛛素虎纹捕鸟蛛素-Ⅰ ssDNA-Biotin-SA-AuNPs复合物 标记的透明质酸(HA-biotin PAH-Biotin修饰半 Biotin-Ebselen小分子探针 偶联四氨基卟啉 胆碱磷酰化偶联壳聚糖 Chol-Dex-Biotin?偶联葡聚糖修饰 DOTA-Biotin偶环配体造影 藻胆蛋白标记Phycobiliprotein-Biotin 藻胆蛋白-链霉亲和素(Streptavidin-phycobiliprotein) 偶联物OVA-ZEN-biotin (Biotin)偶联的多肽zs6 Biotin-DNA偶联物 鸡卵清白蛋白偶联(Biotin-OVA) 辅酶A-(Coenzyme A-biotin) FITC标记的转铁蛋白(Tf-FITC) (biotin)修饰的ddNTP核苷酸 活化的转铁蛋白(Biotin-Tf) HEMA-biotin-Lys-CD 蛤蚌素-偶联物 姜黄素-偶联物 多肽CRGD修饰红细胞膜 偶联胆甾醇化乙二醇壳聚糖 -葡聚糖聚醛偶联物(Chol-Dex-CHO) BIO修饰阿霉素DOX-biotin 修饰科研BIOTIN-Drud CY3/CY5/CY5.5-Biotin修饰荧光染料 温馨提示：西安齐岳生物科技有限公司供应的产品用于科研，不能用于人体、科研研究、和其他商业用途，如有购买方或方采购我公司的产品用于、科研研究或商业用途，购买方或方将承担法律责任，我公司也将追究其法律责任以上产品均可定购 ? 相关目录： Biotin-PEG2-C4-alkyne|cas1011268-28- H2N/Amino-PEG2-COOH；氨基-二聚乙二醇

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西安齐岳生物科技有限公司是集化学科研和定制与一体的高科技化学公司。业务范围包括化学试剂和产品的研发、生产、销售等。涉及产品为通用试剂的分销、非通用试剂的定制与研发，涵盖生物科技、化学品、中间体和化工材料等领域。
主营产品：COF、MOF单体系列：三蝶烯衍生物、金刚烷衍生物、四苯甲烷衍生物、peg、上转换、石墨烯、光电材料、点击化学、凝集素、载玻片、蛋白质交联剂、脂质体、蛋白、多肽、氨基酸、糖化学等。